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蛋白質(zhì)保存方法大全
  • 發(fā)布日期:2018-02-28      瀏覽次數(shù):2840
    • 蛋白質(zhì)的保存是一個(gè)比較棘手的問(wèn)題,分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的童鞋們或多或少都會(huì)碰到。 有沒(méi)有遇到過(guò),不同批次純化的蛋白,采用同樣的測(cè)試方法,活性卻不太一樣? 有沒(méi)有遇到過(guò)新純化的蛋白,從冰箱拿出融化后,居然沉淀了? 蛋白質(zhì)純化后,保存方式都有哪些呢?  

       

      一、謹(jǐn)記蛋白質(zhì)的保存原則 

      低溫、分裝、濃縮、速凍/速融、添加劑  

       

      二、保存方法你知多少 

      蛋白質(zhì)的的保存方法的選擇*取決于蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性以及保存后什么時(shí)候再次使用你的蛋白。 

      1、如即提即用的話,可將濃縮蛋白質(zhì)儲(chǔ)存在單一溶液(如PBS),置于聚丙烯管或干凈的玻璃容器中,放在4°C冰箱保存。 
      優(yōu)點(diǎn):蛋白容易獲得,可以快速進(jìn)行實(shí)驗(yàn),且同一管樣品可重復(fù)取樣,這樣避免了因經(jīng)常解凍而加速蛋白的降解。  
      缺點(diǎn):可能會(huì)面臨微生物污染,蛋白質(zhì)失活和氧化,可能對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的均一性造成影響。要避免這種情況,可以把蛋白質(zhì)分成小份儲(chǔ)存,并加入蛋白酶抑制劑、抗菌劑和還原劑等。但也要根據(jù)自己蛋白的情況,如果你的蛋白是完整的膜蛋白或分泌蛋白,很可能分子內(nèi)存在二硫鍵,為保證其完整性,應(yīng)該存儲(chǔ)在氧化環(huán)境中。另外,儲(chǔ)存時(shí)間超過(guò)一個(gè)月的蛋白可以考慮扔掉。  

      2、透析到合適的緩沖液中可以凍干,放保存;也可加高濃度的硫酸銨(你的蛋白不沉淀的話),保存。 
      注意:你要注意加入硫酸銨后pH會(huì)下降一些,你的緩沖液可不能太接近蛋白的等電點(diǎn)啊,蛋白在等電點(diǎn)附近沉淀很多時(shí)候是不可復(fù)溶,即使復(fù)溶活性也不能保證。  

      3、純化后的蛋白測(cè)濃度后,加入50%甘油,確認(rèn)混勻后分裝,液氮速凍,放入-20度或-80度保存,尤其適用于酶類。 
      優(yōu)點(diǎn):在低溫下,蛋白質(zhì)對(duì)微生物污染,蛋白酶降解和氧化反應(yīng)更有抵抗力,容易保證其活性。用甘油或乙二醇稀釋使蛋白處于溶液中,可以方便取樣。此外,這種方式儲(chǔ)存的蛋白質(zhì)可以保存長(zhǎng)達(dá)一年,對(duì)于抗體軛合物是一個(gè)好的選擇。  
      缺點(diǎn): 蛋白質(zhì)在-20°溶液中仍有可能遭受水解、污染和氧化,如果蛋白對(duì)還原性環(huán)境要求比較高,也需加入抑制劑、還原劑等。而且將樣品存放在50%冷凍保護(hù)劑中有時(shí)是不可取的,取決于你接下來(lái)要做的實(shí)驗(yàn)。  

      4、有些蛋白可以不加甘油,直接液氮速凍幾分鐘,-80度保存。 
      優(yōu)點(diǎn):可以長(zhǎng)期保存(多年),不需要甘油、疊dan化鈉等化學(xué)物質(zhì),避免蛋白質(zhì)降解或微生物污染。缺點(diǎn):冷凍蛋白質(zhì)應(yīng)一次性使用,為了避免反復(fù)凍融發(fā)生降解。此外,抗體軛合物(特別是堿性磷酸酶復(fù)合物)冷凍后可能會(huì)失活。  

      5、長(zhǎng)期保存蛋白質(zhì)的另一個(gè)方式是凍干(lyophilization)。 
      優(yōu)點(diǎn):蛋白質(zhì)凍干后會(huì)呈現(xiàn)蓬松的白色粉末形式,處于*脫水的狀態(tài),可以在冰箱中無(wú)限期保存。  
      缺點(diǎn):對(duì)于某些蛋白質(zhì),凍干操作有一個(gè)潛在問(wèn)題就是蛋白質(zhì)不能復(fù)溶。凍干/復(fù)溶的過(guò)程同樣會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)產(chǎn)生一定的傷害作用。  

       

      三、這些重點(diǎn)你要知道 

      1、保證恒定的pH值,一般PBSzui為常用; 

      2、保證一定的蛋白濃度,如果濃度比較稀的話,可以考慮添加一定量的BSA; 

      3、甘油的添加也能在很大程度上提高抗體的穩(wěn)定性; 

      4. 為了防腐可以添加一定量的疊dan化鈉(辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的二抗一般不能加),如果樣品要用于生物學(xué)檢測(cè),避免使用防腐劑。 

      5、無(wú)論是冷凍還是儲(chǔ)存在溶液中,將蛋白進(jìn)行分裝,以避免凍融,降低污染的風(fēng)險(xiǎn)。 

      6、進(jìn)行蛋白質(zhì)操作實(shí)驗(yàn)時(shí)一定要帶手套,們的皮膚上有一些蛋白酶,這些蛋白酶很可能會(huì)降解掉我們的蛋白樣品。皮膚上的其他化學(xué)分子也可能會(huì)污染蛋白樣品。另外,為了防止細(xì)菌的生長(zhǎng),蛋白質(zhì)保存在滅菌的小管中。 

      7、避免反復(fù)凍融或凍干重溶解過(guò)程,這樣很可能會(huì)降低生物活性。 

      8、避免震蕩,震蕩產(chǎn)生的剪切力有可能會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)產(chǎn)生破壞作用。震蕩時(shí)溶液中會(huì)產(chǎn)生氣泡,氧氣的進(jìn)入會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)處在氧化環(huán)境中。蛋白質(zhì)中含有半胱氨酸,其極易被氧化為胱氨酸,這一過(guò)程很可能會(huì)破環(huán)蛋白質(zhì)的活性。

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